La chromatographie est une méthode physique de séparation et d'identification des espèces chimique d'un mélange.
La chromatographie sur couche mince (CCM) est effectuée en vue de l'analyse d'un mélange.
- Cuve à chromatographie
- Solvant
- Plaque de chromatographie
- Mélanges
- Cure-dents
Remplir la cuve à chromatographie du solvant qui constitue l'éluant. Verser le mélange jusqu'à atteindre environ 0,5 cm de hauteur dans la cuve et la recouvrir de manière à éviter l'évaporation des solvants.
Sur la plaque chromatographique, tracer au crayon à papier un trait horizontal à environ 1 cm du bord inférieur. Le trait constituera la ligne de dépôt, et il ne devra pas tremper dans le solvant d'élution contenu dans la cuve.
À l'aide de pointes ou de cure-dents, déposer sur la plaque les échantillons de mélange (mélanges témoins et mélange à analyser) à 0,5 cm d'intervalle et les laisser sécher.
Introduire la plaque verticalement dans la cuve de manière à ce que la ligne de dépôt soit au-dessus du solvant et boucher la cuve.
Le solvant monte le long de la plaque par capillarité en entraînant les constituants du mélange, c'est l'élution. Lorsque le solvant atteint les trois quarts de la plaque, soit environ 1 cm du haut de la plaque, la retirer de la cuve et marquer immédiatement par un trait la ligne de front (la hauteur maximale atteinte par l'éluant).
Une fois le solvant évaporé, lire le chromatogramme.
- Si les échantillons sont des composés colorés on peut lire directement le chromatogramme.
- Si les échantillons sont incolores, il faut passer par la révélation en utilisant une lampe à ultraviolet, des vapeurs d'iode ou une solution de permanganate de potassium.
Mesurer le rapport frontal $Rf$ en utilisant la formule suivante : $$Rf=\dfrac{h}{H}$$
- La hauteur parcourue par le solvant entre les deux traits de la plaque est notée $H$.
- La hauteur parcourue par une tache entre la ligne de dépôt et sa hauteur finale est notée $h$.
