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Marianne

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Utiliser un spectrophotomètre
Fiche pratique

Introduction

Un spectrophotomètre permet de mesurer l’absorbance d’une solution colorée pour une longueur d’onde donnée.

Matériel

  • Spectrophotomètre
  • Cuve

Etapes

  1. Allumer le spectrophotomètre

    • Brancher le spectrophotomètre sur une prise secteur, appuyer sur le bouton « ON » et choisir le mode « A » pour absorption.
  2. Étalonner le spectrophotomètre

    • Remplir aux trois quarts une cuve avec le solvant de la réaction. Le solvant est ce qu’on ne souhaite pas mesurer.
    • Placer la cuve dans le spectrophotomètre en faisant attention à la direction du rayon lumineux : il faut que celui-ci traverse la cuve par ses faces transparentes.
    • Fermer la porte et sélectionner, à l’aide des flèches, la longueur d’onde pour laquelle l’absorbance est la plus élevée.
    • Appuyer ensuite sur le bouton « zéro » pour refaire une mesure d’absorbance.
  3. Réaliser une mesure

    • Placer une cuve remplie aux trois quarts avec la solution à analyser.
    • Fermer la porte et regarder la mesure de l’absorbance de la solution.
    • De la même manière, répéter l’opération pour réaliser les mesures d’absorbance pour toute une gamme de solution.
  4. Interpréter les résultats

    • Le spectrophotomètre peut afficher des messages d’erreur comme une valeur négative si l’absorbance est trop faible. Il faut alors concentrer la solution et refaire toute la manipulation ainsi que le blanc.
    • De même, il peut afficher « >2> 2 », si la solution est trop concentrée, il faut alors diluer la solution et reprendre la manipulation depuis le début.
    • Utilisez la loi de Beer-Lambert pour calculer la concentration d’une solution à partir de son absorbance.
  5. Éteindre le spectrophotomètre

    • Appuyer sur le bouton « OFF » puis débrancher l’appareil.