Fiche pratique : Utiliser un spectrophotomètre

Un spectrophotomètre permet de mesurer l’absorbance d’une solution colorée pour une longueur d’onde donnée.

• Spectrophotomètre
• Cuve

Allumer le spectrophotomètre

• Brancher le spectrophotomètre sur une prise secteur, appuyer sur le bouton « ON » et choisir le mode « A » pour absorption.

Étalonner le spectrophotomètre

• Remplir aux trois quarts une cuve avec le solvant de la réaction. Le solvant est ce qu’on ne souhaite pas mesurer.
• Placer la cuve dans le spectrophotomètre en faisant attention à la direction du rayon lumineux : il faut que celui-ci traverse la cuve par ses faces transparentes.
• Fermer la porte et sélectionner, à l’aide des flèches, la longueur d’onde pour laquelle l’absorbance est la plus élevée.
• Appuyer ensuite sur le bouton « zéro » pour refaire une mesure d’absorbance.

Réaliser une mesure

• Placer une cuve remplie aux trois quarts avec la solution à analyser.
• Fermer la porte et regarder la mesure de l’absorbance de la solution.
• De la même manière, répéter l’opération pour réaliser les mesures d’absorbance pour toute une gamme de solution.

Interpréter les résultats

• Le spectrophotomètre peut afficher des messages d’erreur comme une valeur négative si l’absorbance est trop faible. Il faut alors concentrer la solution et refaire toute la manipulation ainsi que le blanc.
• De même, il peut afficher « $> 2$ », si la solution est trop concentrée, il faut alors diluer la solution et reprendre la manipulation depuis le début.
• Utilisez la loi de Beer-Lambert pour calculer la concentration d’une solution à partir de son absorbance.

Éteindre le spectrophotomètre

• Appuyer sur le bouton « OFF » puis débrancher l’appareil.